ROS的检测方法

2024-09-27 ROS在细胞生命，应激和死亡中具介导作用，今天让我们来聊下ROS吧~一、ROS简介活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）广泛指代氧来源的自由基和非自由基，包含了超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（OH-）、臭氧（O3）和单线态氧（1O2），由于它们含有不成对的电子，因而具有很高的化学反应活性。在机体内，ROS的主要来源之一是线粒体内膜的呼吸链底物端，在线粒体中的电子传递链复合物将电子传递给O2的过程中，有一部分O2被还原，形成O2-或H...

无血清培养基配方、使用方法

2024-09-26 一、前言细胞培养技术在生命科学研究领域是must的。在科研上，细胞培养基（medium）一般都会加入血清（Serum）来补充蛋白质（protein）、生长因子（growthfactor）或其他营养物质（nutrients）等，大部分细胞培养会选择使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年来也陆续有多样的血清种类，例如：人类血小板生长因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研...

细胞培养的一般过程

2024-09-26 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的shou次培养称为原代...

RNA酶保护试验方法优缺点

2024-09-26 一、工作原理RNA酶保护法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下简称RPA），是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。基本原理：将标记的特异RNA探针（32P或生物素）与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化，故该方法命名为RNA酶保护实验。二、RPA法优...

选择来源安全、可追溯的新生牛血清至关重要

2024-09-26 新生牛血清是从出生0天至1周内或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于细胞培养和疫苗生产等生物制药领域。在选购时应该关注血源的可追溯性、质量认证以及适用性；操作时应注意血清的采集、储存条件和逐步适应训练等。新生牛血清的选购指南：1.血源可追溯性：选择来源安全、可追溯的新生牛血清至关重要。市面上存在较多以假乱真的产品，因此科研工作者需要对血清的真实产地、来源进行充分了解和鉴别。2.质量认证：通过严格的质量控制和多项性能测试。例如，某些特优级胎牛血清会有多达70项质量测试，...

生物制药中残留DNA检测试剂盒推荐

2024-09-25 一、前言生物制药是利用生物技术从组织、细胞等生物体中分离出有效成分后制备出的用于预防、治疗和诊断的制品，如疫苗，重组蛋白药等。目前，已开发出多种生产用的细胞系，如CHO细胞、大肠杆菌、VERO细胞等细胞系。然而这些通过大肠杆菌，CHO细胞等培养生产的生物制剂会含有宿主细胞残留DNA等特定的杂质，残留DNA会引发潜在的安全问题（如潜在致瘤性、传染性，甚至增加免疫源性或导致突变），所以相关的法律法规相继出台，以对生物制品中外源宿主DNA残留量进行严格把控。如WHO和美国FDA现行...

大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备

2024-09-25 一、DH5αDH5α是大肠杆菌(Escherichiacoli)的一种感受态细胞系，通常被用于分子生物学实验中。这些细胞被设计成对外源DNA接受性较高，因此在分子克隆、DNA转化和质粒扩增等实验中被广泛使用。DH5α感受态细胞对于吸收外源DNA特别有效，这使得它们在基因工程和分子生物学研究中成为常见的实验室工具。二、操作步骤1、前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2、取1ml过夜培养物转接于100mlLB培养基中，...

BCA法实验原理、操作步骤

2024-09-25 一、实验原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应，使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。‌二、操作步骤准备标准品和样品‌：将标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀释成一系列已知浓度的溶液，作为标准曲线。同时，将待测样品适当稀释，确保其在标准曲线的线性范围内...