qPCR实验的Ct值有什么作用？

2023-09-18 qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。那么你知道qPCR实验中的Ct值有什么作用吗？让我们一起来看看吧！一、指数扩增、模板量与Ct值的关系理想情况下，qPCR中的基因经过一定的循环数被指数扩增而积累，扩增循环数和产物量之间的关系是：扩增产物量=起始模板量×（1+En）循环个数。然而qPC...

病毒转染实验有何注意事项？

2023-09-14 病毒转染是指将外源病毒导入真核细胞的技术，用病毒将带有目的基因的载体整合到细胞的基因组中，以达到长期稳定表达目的基因的目的。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。那么病毒转染实验有何注意事项呢？让我们一起来看看吧！一、病毒安全性问题病毒本身具有一定的危险性，需要在符合生物安全实验室标准的条件下进行实验，并遵守相关的实验室安全操作规范。病毒操作时最好使用生物安全柜。如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风扇。病毒操作时...

如何提高电转效率？

2023-09-14 电转，也称电穿孔法，是通过脉冲电流在细胞膜上打孔，将外源分子（DNA、RNA、mRNA等）导入真核细胞内，来改变细胞的特性，从而达到改造细胞的目的，是实现细胞基因功能和蛋白质表达研究的重要工具。那么该如何提高电转效率呢？让我们一起来看看吧！一、细胞收集时：1)在消化贴壁细胞时，一定要注意终止胰酶反应，防止过度消化；最好使用专业的胰酶中和剂；2)在进行细胞离心时，使用低转速长时间离心，提升细胞的存活率；3)选择合适状态的细胞，一般原代细胞可以传1-2次后使用；尽量挑选迭代次数少...

贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别是什么？

2023-09-13 细胞培养有两种基本方式，一种是人工基质上的单层细胞（贴壁培养），另一种是在培养基中自由漂浮（悬浮培养）。那么你知道贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别是什么吗？让我们一起来看看吧！来自脊椎动物的大多数细胞，除了造血细胞系和少数其他细胞系，都是贴壁依赖性的，必须在经过专门处理以允许细胞粘附和扩散的合适基质上培养。然而，许多细胞系也适用于悬浮培养。同样，大多数市售昆虫细胞系在贴壁培养或悬浮培养中生长良好。悬浮培养的细胞可以保存在未经组织培养处理的培养瓶中，但随着培养体积与表面积的增加...

什么是原代细胞培养和细胞生长曲线？

2023-09-13 你知道什么是原代细胞培养，和细胞生长曲线吗？，让我们一起来看看吧！一、原代细胞培养原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首ci培养，也叫初代培养。原代培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最chang用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。二、细胞生长曲线细胞生长曲线是测定细...

荧光定量PCR的原理是什么？

2023-09-12 荧光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。那么你知道荧光定量PCR的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！以探针法荧光定量PCR为例：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。开始时，探针完整地结合在DNA任意一条单链上，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号...

细胞传代的实验步骤是什么？有何注意事项？

2023-09-12 在细胞培养过程中，去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的培养基中，维持细胞的活力与增殖。细胞传代既可以扩大细胞培养量，也能够避免细胞因进入平台期而出现生长抑制甚至死亡的情况。那么你知道细胞传代的实验步骤是什么吗？有何注意事项呢？让我们一起来看看吧！一、实验步骤1.贴壁细胞的传代:1)倒置显微镜下观察细胞形态及密度，评估细胞的状态，以作为传代比例的参考。2)提前紫外杀菌（至少30min为宜）操作台及实验材料。3)注意无菌操作，在操作台中吸除或倒掉培养皿内旧培养液（尽可能去...

如何选择蛋白表达系统？

2023-09-11 在蛋白表达系统的相关研究中，从头合成蛋白质并不是一个可行的选择。因此需要借助活细胞或细胞器用作生产和构建蛋白质的工厂。那么你知道该如何选择蛋白表达系统吗？让我们一起来看看吧！目前，较为主流的表达宿主有大肠杆菌（E.coli）、毕赤酵母（P.pastoris）、昆虫-杆状病毒（Bac-to-Bac系统）以及哺乳动物细胞系（CHO、HEK293）等。一、细菌优点：1.遗传背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力强；3.表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好；4.商品化的载体...