如何提取细胞核蛋白？

2024-11-20 本文介绍一下用匀浆器研磨法提取贴壁细胞核蛋白的具体操作。一、前期准备1、台盼蓝染液：取台盼蓝粉剂，将其溶解在10mL的双蒸水当中配制成质量体积比为4%（4%w/v）的台盼蓝母液。在使用时，利用PBS缓冲液将母液稀释10倍，使其浓度达到0.4%，之后再与细胞悬液混合均匀。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值为7.9）、1.5mmol/L的氯化镁、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫苏糖醇（DTT）。若担心浆蛋白降解会对核蛋白产生影响...

细胞凋亡的检测

2024-11-19 一、光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。检测方法：细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变，结合显微测量工具可作凋亡细胞计数。二、视频时差显微技术细胞培养中常用，通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程，尤其是观察细胞表和外形的变化。检测方法：收集2×10^5细胞/ml培养的细胞，置于多孔培养板，加入凋亡诱导剂，在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变，每隔1分钟作序列摄影...

PCR扩增反应中的嵌合体是什么？

2024-11-18 PCR实验中产生的嵌合体你知道是什么呢？它怎么产生的呢？那又如何预防和处理呢？这篇文章让我们一起了解一下吧！一、PCR嵌合体是什么PCR嵌合体(ChimericProducts)：PCR扩增反应中的嵌合体是指一个PCR产物来自两个或多个模板分子，通常是由于延伸未完quan导致的‌。这种现象通常发生在PCR反应中，特别是当使用多重PCR或复杂模板时。嵌合体会导致扩增产物中含有非预期的片段，有可能会影响实验结果的准确性，甚至导致错误的解释。二、形成原理在PCR反应中，DNA模板在...

流式细胞仪怎么分选T细胞?

2024-11-18 上文介绍了流式细胞术的原理及应用，今天让我们学习一下怎么用流式细胞仪分选T细胞吧~一、样本制备1.取样:取100μL抗凝血。2.标记：根据抗体说明书标记实验管。混匀后，室温避光孵育15分钟。3.溶血：将10×裂红液用水稀释10倍，每管加入1mL，振荡器混匀后室温避光静置10分钟，300g，4°C离心5分钟。4.洗涤：弃去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g离心洗涤5分钟，洗2-3次。5.上机检测：弃去上清后加入500μL1×PBS，混匀悬浮后过滤，避光等待上机检测。二、仪...

流式细胞术原理及应用

2024-11-15 流式细胞仪在手，却不知道原理？快来看看这篇文章吧！一、流式细胞术实验原理流式细胞术（FlowCytometry,FCM）是一种单细胞定量分析技术，该技术通过测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收等参数，可以定量分析细胞的结构特征（如DNA含量、蛋白、细胞膜、胞浆或胞核抗原表达量）和功能特征（如细胞内酶活性、钙流变化等）等多种重要参数，进行细胞特征分析与分选。它的核心功能是将混合物中的不同细胞分离并计数，将感兴趣的细胞分选出来，提供分类比例并进行进一步分析。二、流式细胞技术应用1...

引物探针的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探针的使用步骤‌引物探针使用步骤一：‌设计引物和探针‌：首先需要根据目标DNA序列设计特异性引物和探针。引物的长度一般为20-25个核苷酸，探针的长度一般为15-25个核苷酸。设计时要注意避免非特异性扩增，确保引物的特异性和探针的Tm值比引物Tm值高8-10°C‌。引物探针使用步骤二：‌提取模板DNA‌：从待测样本中提取DNA，作为PCR反应的模板。确保模板DNA的质量和浓度，以获得可靠的实验结果‌。引物探针使用步骤三：‌配制PCR反应体系‌：根据实验需求，配制含有引...

IHC出现假阳性、假阴性等问题该怎么办?

2024-11-13 ‌免疫组化（IHC）实验中出现假阳性和假阴性了怎么办呢？一、假阳性的处理1.‌降低一抗浓度‌：通过降低一抗的浓度，可以减少非特异性结合，从而降低假阳性。通常，降低浓度至能看到阳性表达且能明显区分阳性区域与周围间质即可‌。2.‌调整封闭条件‌：逐步提高封闭条件，从山羊血清到5%BSA+山羊血清，最终至5%脱脂奶。通常调整至5%BSA+山羊血清即可，不建议轻易使用5%脱脂奶‌。3.‌选择合适的二抗‌：对于动物标本，选择抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免种属间抗原抗体反应引...

离心柱法提取DNA步骤

2024-11-13 常见核酸提取纯化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分离技术、离心柱纯化法等，今天我们来看下离心柱法的实验步骤和优缺点吧~一、离心柱法提取DNA步骤离心柱法提取DNA步骤一将组织或细胞悬液加入裂解缓冲液，涡旋混匀。裂解缓冲液中含有变性剂（如胍异硫氰酸盐），可以有效地裂解细胞和组织，破坏细胞膜和细胞核膜，同时使核酸与蛋白质分离。离心柱法提取DNA步骤二将裂解液转移到DNASpinColumn中，离心收集流穿液。这个步骤涉及到将裂解液通过一个特殊的膜过滤，该膜具有特定的孔径，允许小分子...